La gélose au cétrimide est un milieu sélectif utilisé pour l' isolement et l'identification présomptive de Pseudomonas aeruginosa. Le pouvoir sélectif repose sur le cétrimide, un ammonium quaternaire capable d'inhiber un très grand nombre de bactéries. Cette gélose devient hautement sélective de Pseudomonas aeruginosa si on l'incube à 42°C. Cette gélose existe avec ou sans acide nalidixique. Grâce à une composition très proche de celle du milieu King A, ce milieu favorise la production de la pyocyanine et donc facilite le repérage des Pseudomonas aeruginosa. Gélose — Wikipédia. La pyocyanine est un pigment bleu produit par un très grand nombre de souches de Pseudomonas aeruginosa. Sur ce milieu, les souches de Pseudomonas aeruginosa produisent également un autre pigment, appelé pyoverdine ou fluoresceine. Ce pigment jaune-vert est fluorescent lorsque les cultures sont placées sous lampe UV. Composition de la gélose au cétrimide
Peptone de gélatine
16, 0 g
Peptone de caséine
10, 0 g
Cétrimide
0, 2 g
Acide nalidixique ou pas
15 mg
Sulfate de potassium
Chlorure de magnésium
1, 4 g
Agar
pH = 7, 1
Eau distillée
qsp 1 L
Gélose — Wikipédia
7) Robustesse et stabilité des réactifs
La robustesse est une mesure de la capacité d'une méthode à supporter de faibles
changements de conditions expérimentales. Le test de robustesse est indispensable en
portée B du fait de l'utilisation de conditions d'analyse différentes de celles recommandées
par le fournisseur Bruker®. En effet, celui-ci recommande d'utiliser des cultures fraîches
de 18h sur gélose au sang. Le but de la validation de méthode réalisée ici était d'évaluer
l'influence de la durée d'incubation et de la nature des milieux de culture sur les résultats
d'identification. Ainsi ont été évaluées les performances du MALDI sur des cultures de 24, 48 et 72
heures isolées sur des milieux de type gélose au sang (bioMérieux®) gélose trypticase soja
(TSA) (bioMérieux®), géloses sélectives cétrimide (bioMérieux®) et CFC (bioMérieux). La température d'incubation utilisée était de 30°C pour toutes les conditions testées, en
atmosphère aérobie. Pour tester la robustesse, les 7 souches ATCC ont été testées en
double après culture sur les quatre différents milieux et après les trois différents délais
d'incubation.
La gélose au sang frais, comme son nom l'indique, est constituée d'une base nutritive non sélective à laquelle a été ajoutée 5% de sang frais. Elle convient à la culture de certaines bactéries exigeantes, et permet de mettre en évidence le pouvoir hémolytique de certaines bactéries. Cultivent, par exemple, sur ce milieu, les Streptococcus, Neisseria meningitidis, les corynébactéries et bien sûr toutes les bactéries non exigeantes. La base nutritive utilisée est le plus souvent une gélose Columbia ou une gélose Trypticase-soja. Ces bases doivent être naturellement isotoniques pour éviter la lyse spontanée des hématies et ne doivent pas contenir de glucose car ce dernier inhibe l'hémolyse par les bactéries. Le sang frais utilisé est, au préalable, défibriné pour éviter qu'il ne coagule. C'est presque exclusivement du sang de cheval ou de mouton. Composition gélose Columbia
Mélange de peptones
18, 0 g
Extrait de levure
5, 0 g
Amidon de maïs
1, 0 g
Chlorure de sodium
Agar
10, 0 g
pH = 7, 3
Eau distillée
qsp 1 L
La gélose au sang + ANC
C'est une gélose au sang frais rendue sélective des bactéries à Gram positif en ajoutant deux antibiotiques: l' A cide N alidixique et la C olistine.
Adam Lowers - Maître d'œuvre Northwest Cascade, Etats-Unis
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