Composition en g. L -1 de milieu:
Tryptone: 5, 0 g. L -1
Extrait autolytique de levure: 2, 5 g. L -1
Glucose: 1, 0 g. L -1
Agar agar: 15, 0 g. L -1
pH du milieu prêt à l'emploi à 25°C: 7, 0 ± 0, 2. Ex. 2: le milieu Sabouraud + chloramphénicol: la gélose de Sabouraud au chloramphénicol est recommandée pour l'isolement des levures et des moisissures, surtout lorsque les prélèvements sont fortement contaminés par des bactéries
Peptone 10 g. L -1
Glucose 20 g. L -1
Agar 15 g. L -1
Chloramphénicol: 0, 5 g. L -1
pH du milieu prêt à l'emploi: 5, 7 ± 0, 2
1. D'après le dénombrement envisagé, indiquer lequel de ces deux milieux est le plus adapté. 3 ème partie: choix des dilutions à effectuer
Connaissant déjà la concentration en nombre de cellules viables dans le produit étudié (cf. partie 1), il faut savoir quelle(s) dilution(s) réaliser pour répondre aux conditions suivantes:
le nombre maximal de colonies par boite est de 150 pour les levures (300 pour ds bactéries sur un milieu ne permettant pas de lire de caractèresd biochimiques)
la concentration mesurée en levures vivantes C N (levures vivantes; préculture) dans la préculture est 8, 0 x 10 6 -1
la préculture doit être diluée successivement en série (en cascade) de raison géométrique 1/10 dans des tubes de 9 mL de diluant (eau physiologique);
l'inoculum à ensemencer dans la masse du milieu gélosé est de 1 mL.
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3. Commenter la qualité de la réalisation de chacun de ces isolements. Indiquer quelles erreurs ont pu être commises (voir ci-dessus 3 ème partie: "points critiques"). Voici une autre série de résultats, obtenus sur des dilutions plus importantes:
4. Effectuer le comptage des colonies. 5. Analyser la cohérence interdilution dans chacun des deux cas (on considèrera que la cohérence entre deux dilutions successives est satisfaisantes si le rapport du nombre de colonies est compris entre 8 et 12)
6. Indiquer si la norme IS07218 officialisant l'utilisation d'une seule boite par dilution peut être appliquée (voir Fiche Technique expliquant la norme)
7. S'agissant de levures, et toujours d'après cette norme, indiquer quelle(s) boite(s) pourraient être retenues pour les calculs. Deux aspects de colonies de levures (sur les trois observables) après culture (technique d'incorporation dans la masse d'un milieu gélosé):
Photo 1) colonie circulaire et très aplatie (par la masse de gélose) s'étant développée sur le fond de la boite
Photo 2) un petit carré de gélose a été découpé pour mettre en évidence le développement de la colonie en partie dans la masse de la gélose et en partie en surface
N= NPP /V inoculum xFd N= 25 / 10 -3 N= 25 X 10 3 micro-organismes par mL Résultats: Afin de simplifier la lecture des résultats, nous avons fait un tableau contenant les résultats de tous les groupes d'étudiants pour pouvoir par la suite réaliser une moyenne. Cette moyenne nous permet d'être plus précis et de la comparer aux normes en vigueur.... Uniquement disponible sur
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