Spécificité
La glucose-oxydase est spécifique du β-D-glucose. Elle catalyse l'oxydation du β-D-glucose selon la réaction suivante:
glucose + O 2 + H 2 O -------> glucono-1, 4-lactone + H 2 O 2
Le glucose à pH 7 se trouve sous forme cyclique à raison de 36, 4% de β-D-glucose et de 63. 6% d'α-D-glucose. La forme linéaire représente une fraction négligeable. L'oxydation du β-D-glucose déplace l'équilibre et l'α-D-glucose se transforme rapidement en β-D-glucose. L'action de la glucose-oxydase sur le glucose se traduit par une très rapide consommation de dioxygène très facilement mesurable avec production de gluconolactone et de peroxyde d'hydrogène. Avec tous les autres sucres, la consommation de dioxygène n'a pas lieu. Spécificité de substrat de la glucose-oxydase
Quels sont les sucres les plus intéressants? Ceux qui ont une structure proche du β-D-glucose. Test à l oxidase . On peut utiliser le L-glucose qui est cher ou le D-galactose beaucoup moins coûteux. Formules linéaires des trois oses
p H
Température
Ce travail est difficile à mener à bien, car il faut veiller à mettre à la même température la solution de glucose, l'enzyme et le récipient qui recevra le mélange.
Oxydase : Définition Et Explications
Conseils d'utilisation
Un marquage vert caractérise, sur l'une des extrémités de la bandelette en papier, la surface de réaction imprégnée de réactif de détection. Les colonies à contrôler, sont à étaler sur la surface de réaction. L'apparition, en l'espace de 15 secondes, d'une coloration bleue foncée/violette, indique la présence de bactéries oxydase positives. La glucose-oxydase : résultats EXAO - SVT Lyon. Les bactéries suivantes sont typiquement des bactéries oxydase positives: Helicobacter pylori, Vibrio cholerae, Campylobacter jejuni, Legionella pneumophila, Neisseria, Moraxella, beaucoup de Pseudomonas et diplocoques. Les entérocoques sont typiquement oxydase négatives. Dans le panier
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Couleur du papier blanc Marquage de la surface de réaction vert Virage de la couleur vers le bleu conforme Virage de la couleur, germes de contrôle conforme
La Glucose-Oxydase : Résultats Exao - Svt Lyon
Laprésence de bulles d'oxygène: Labactérie possède la catalase, elle est dite →Catalase+. L'absence de bulles d'oxygène: La bactérie ne possède pas lacatalase, elle est dite
→Catalase-. 1. 4. Oxydase : définition et explications. teste de Hugh Leifson:
Le milieu OF, milieu de base pour la détermination de l'oxydation et de la fermentation
selon Hugh et Leifson couramment dénommé milieu de Hugh et Leifson, a été mis au point
par ces deux microbiologistes en 1953 pour étudier le métabolisme oxydatif et fermentatif
des micro-organismes durant la dégradation des glucides (Delarras., 2007). a. Préparation du milieu: [voir annexe 1]
Ce milieu permet de déterminer la voie d'attaque du glucose utilisé comme source d'énergie
par la plupart des bactéries. Pour synthétiser de l'énergie, les bactéries peuvent attaquer par:
• Voie oxydative: le glucose est utilisé uniquement en présence de dioxygène (faible
libération d'acides). • Voie fermentative: le glucose est utilisé en absence de dioxygène et en présence de
dioxygène ou seulement en absence de dioxygène (forte libération d'acides) (LNPV.,
2005).
De plus, il est difficile de maintenir constante la température au cours de l'expérience. On peut aussi mettre en évidence la dénaturation de l'enzyme par la chaleur. Concentration de substrat
Concentration d'enzyme
Recherche de la composition des osides
La glucose-oxydase peut permettre de faire découvrir, au moins en partie, la composition de certains osides. Exemples: le saccharose et l'amidon. Le saccharose peut être hydrolysé par un filtrat obtenu après macération pendant quelques minutes d'un gramme de levures dans 10 mL d'eau. Il convient de faire deux témoins, l'un avec le saccharose non hydrolysé et l'autre avec l'extrait de levures seul. La glucose-oxydase montre la présence de glucose dans l'hydrolysat. Il est à noter que l'hydrolyse du saccharose donne de l'α-D-glucose et du β-D-fructose. Aucun de ces sucres ne devrait réagir avec l'enzyme. Cependant, il y a mutarotation spontanée de l'alpha-D-glucose en beta-D-glucose. Il est donc inutile d'ajouter de la mutarotase comme certains livres le préconisent.
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Pour bien comprendre le danger que représente l'inhalation de polluants, on peut se pencher sur le fonctionnement de nos poumons; ils présentent une surface d'environ 80 m² et leur capacité moyenne est de 6 litres.