The authors
have
studied
Krebs qcle organic acids using and also spot tests reactions. INTRODlJCTION
a method
of separation
chromatography
and cltar;tttcriz:ttii)n
on column,
on paper,
of the
in gas phase,
CHROMATOGRAPHIE DES ACIDES ORGANIQUES BIOLOGIQUES
245
TECHNIQUE
A. Pdparation de l'extrait Comme la preparation des extraits est differente selon la nature du materiel Ctudie, nous presentons dans le Tableau I, quelques exemples de ces preparations. TABLEAU
I
PRfPARATION
DES
EXTRAITS
et organesa"
Vdgge'taux'*
Urine
Se'rum
Tissus
Total de 24 h. SCjour d'une nuit au froid pour precipiter les urates. Filtration. Frais, non hemolyse. Recueillis immediatement apres la morte et conservks au froid. HomogenCis& avec d'ethanol a 75% et garde% au froid pendant une nuit. Centrifuges et homogeneises trois fois, assemblant les surnageants. Identification des acides aminés par chromatographie sur couche minceur.com. Fixes avec d'ethanol B 80" G. L. bouillant. Agitation au froid avec Dowex 50 x 2 (50-100 mesh) H+ Agitation avec Amberlite-IR-rzo (50-100 mesh) H+ --f I heure.
Identification Des Acides Aminés Par Chromatographie Sur Couche Minces
D'après ceci nous pouvons
déterminer la composition de
La migration de l'aspartame non
hydrolysé ne permet pas de
connaitre les différents
composants de l'aspartame. En regardant la migration des
différents composés et en les
comparant à celle de l'aspartame
hydrolysé nous pouvons en déduire
que l'aspartame est composée de:
- phénylalanine Sur quels critères vous appuyez-vous? -acide aspartique
Trop de phrases
Pas assez synthétique
Les deux acides aminés sont liés par une liaison peptidiques
unissant des groupements portés par leur carbone
Acide aspartique
Liaison peptidique
• Le radical de l'acide aminé N-terminal n'absorbe pas la lumière UV
Donc …
Nt
Ct
• L'acide aminé C-terminal est lié par une liaison ester à du méthanol
Liaison ester
Liaison ester (en vert)
0
L'hydrolyse
de l'aspartame dans l'échantillon
est totale étant donné que nous retrouvons
différents acides aminés et qu'il n'y a pas de
spot inconnu sur la plaque.
Identification Des Acides Aminés Par Chromatographie Sur Couche Minceur.Com
Maintenant, la plaque préparée avec le repérage d'échantillon est placée dans la chambre de CCM de sorte que le côté de la plaque avec la ligne d'échantillonnage soit face à la phase mobile. Ensuite, la chambre est fermée avec un couvercle. La plaque est ensuite immergée, de telle sorte que les points d'échantillon sont bien au-dessus du niveau de phase mobile (mais pas immergés dans le solvant - comme indiqué sur l'image) pour le développement. Prévoyez suffisamment de temps pour le développement des taches. Retirez ensuite les assiettes et laissez-les sécher. Les taches d'échantillon peuvent maintenant être vues dans une chambre de lumière UV appropriée ou tout autre procédé tel que recommandé pour ledit échantillon. Démo vidéo
Avantages
C'est un processus simple avec un temps de développement court. Résultats Page 6 Chromatographie sur couche mince | Etudier. Il facilite la visualisation des taches composées séparées. La méthode aide à identifier les composés individuels. Il aide à isoler la plupart des composés. Le processus de séparation est plus rapide et la sélectivité pour les composés est plus élevée (même de petites différences de chimie suffisent pour une séparation claire).
Identification Des Acides Aminés Par Chromatographie Sur Couche Mince
Filtration et rinGage abondant jusqu'a obtention de liquides limpides. Titrage potentiometrique des extraits avec de la soude N/IO. La purification par la r&sine Amberlite IR-120, permet non seulement d'itliminer les substances interferentes, mais Cgalement de determiner le pourcentage de l'aciditi: libre par rapport & la totalite des ions acides libres et salifies (la fraction salifiee pouvant &tre &gale a 60% du total). Nous avons choisi cette resine, et sous la forme Hf, parce qu'il n'y a pas retention des acides par forces de Van der Waals sur la colonne. B. Chromatographie
SW rt%sime
Nous avons utilise la Dowex z x 8 (200-400 mesh) forme formiate ou acetate et Clution avec l'acide formique et acetique respectivement. Nous employons l'une ou l'autre selon la complexite du milieu biologique present. Identification des acides aminés par chromatographie sur couche mince. Si nous sommes en presence d'un milieu ayant peu d'acides organiques, nous pouvons recourir 8. la resine dans la forme HCOO-. Cependant, dans la plupart, des cas cette &sine s'est montree assez inefficace, nous obligeant a l'utiliser dans la forme CH, COO-, en faisant l'elution avec de l'acide acetique, suivie de l'acide formique.
Il est important que le diamètre de la tache produite au moment du dépôt soit faible; idéalement, il ne devrait pas dépasser 3 mm. Ce sont généralement les dépôts les moins étalés qui permettent les meilleures séparations. Pour augmenter la quantité déposée, il est toujours préférable d'effectuer plusieurs dépôts au même point, en séchant rapidement entre chaque application plutôt que de déposer en une seule fois un grand volume d'échantillon qui produirait une tache plus large. L'échantillon est déposé à l'aide d'une micropipette ou d'un tube capillaire en appuyant légèrement et brièvement l'extrémité de la pipette sur la couche d'adsorbant en prenant soin de ne pas le détériorer. Identification des acides aminés par chromatographie sur couche minces. On peut aussi utiliser l'extrêmité, un peu émoussée, d'un cure-dent. On vérifie l'identité des composants présumés d'un échantillon, en procédant à un dépôt séparé d'une solution de chacun d'eux puis à celui de leur mélange. Ces solutions témoins permettent de comparer la migration de chaque composé avec celle de l'échantillon à analyser.
La chromatographie sur papier suit le même principe que la chromatographie sur couche mince. Le papier devient la phase stationnaire «fine», dont la résolution n'est pas comparée à celle obtenue avec les autres variantes de cette technique. La distance atteinte par les substances en chromatographie sur couche mince (voir taches colorées) dépend de la polarité de la phase stationnaire, de la polarité du solvant (phase mobile) et de la polarité des substances. CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (TLC): PRINCIPE ET PROCÉDURE - TIGE - 2022. Caractéristiques de la chromatographie sur couche mince Généralités La chromatographie sur couche mince est essentiellement une méthode analytique. Par conséquent, de très petites quantités de substances à analyser sont utilisées. Les feuilles de chromatographie en couche mince ont un support rigide en verre, en aluminium ou en cellulose, sur lequel est placé le matériau utilisé pour la phase stationnaire. Cela dépend des objectifs à atteindre avec la chromatographie. Parmi les matériaux utilisés en chromatographie sur couche mince, on trouve: le gel de silice ou le gel de silice, l'alumine (oxyde d'aluminium), la cellulose ou le silicate de magnésium.
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