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Procédure opératoire de la chromatographie de gel-filtration du lait
Matériel et dispositif expérimental de la chromatographie
Colonne de chromatographie fermée par un robinet
Gel Séphadex G25 hydraté et lavé, coulé dans la colonne
Eau déminéralisée (éluant)
Une série de tubes à hémolyses numérotés de 1 à 10 et jaugés à 2 mL, en portoir
Pipettes à piston P1000 et cônes bleus
Lait à analyser
PHOTO A VENIR
Attention: le gel ne doit jamais être déshydraté sous peine de dysfonctionnement
Préparation de la colonne
-Retirer les parafilms, placer un bécher poubelle en sortie de colonne. Séphadex | Etudier. -Ouvrir le robinet de la colonne et laisser s'abaisser le niveau du liquide jusqu'à ce qu'il affleure la surface du gel; fermer alors le robinet de la colonne. Dépôt du lait
-Prélever 1 mL de lait dilué, le faire doucement couler le long de la paroi afin qu'il se dépose délicatement sur le gel. -Ouvrir le robinet pour faire pénétrer le lait dans le haut du gel, refermer le robinet. Elution
- Placer le tube à hémolyse n°1 en sortie de colonne.
Tp Chromatographie D Exclusion Sur Gel Sephadex 4
Correction exercice 9:
Voici un diagramme d'élution vraisemblable pour une chromatographie d'exclusion séphadex G-100 ( limite d'exclusion = 100000 Da), sur laquelle on aurait déposé un un mélange d'immunoglobulines G ( MM = 160000 Da) et d'albumine sérique bovine ( MM = 67000 Da). TP - Gel SDS-PAGE - Étude de cas - J.U.. Ici on a représenté la mesure de la densité optique (DO) de l'éluat en fonction du volume d'élution (V e). :
Les IgG présentent une masse moléculaire supérieure à la valeur de la limite d'exclusion de la colonne (100000 Da). Elles seront donc éluées en premier, et donneront la valeur du volume mort de la colonne (V m = V e IgG)
L'albumine de masse moléculaire 67000 g/mol, sera incluse dans le gel et éluée plus tard, avec un V e albumine qui est égal à V m + V e' albumine. 1 -
2 -
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17
Tp Chromatographie D Exclusion Sur Gel Sephadex G-50
La solution de tampon 1 est de nouveau déposée
Exctraction b-galactosidase
9055 mots | 37 pages
Filtration sur SEPHADEX® G-25
Lors du J3 nous avons utilisé du sel [ SO2(NH4+)] pour précipiter
sélectivement les protéines. L'extrait obtenu (C48) est deux fois plus concentré
que l'extrait du départ, seulement, la présence du sel pourrait déranger une
éventuelle purification plus poussée. Lors de cette séance nous allons séparer les protéines du sel et nous
allons déterminer le niveau de pollution par les acide nucléiques. Tp chromatographie d exclusion sur gel sephadex d. Le principe de la filtration:
Les billes de SEPHADEX® sont faites
travaux pratiques de biochimie
5634 mots | 23 pages
utiliserons un gel appelé
Sephadex G50 (le terme Sephadex est un nom générique donné par la firme qui le produit et le chiffre
G50 reflète le pouvoir d'exclusion). Un gel de Sephadex est constitué de billes de polysaccharides hydratés. Mises en suspension dans l'eau ou
dans un tampon, ces billes gonflent fortement en prenant l'aspect d'un gel. Le gel est un réseau poreux
dans lequel les molécules de soluté s'engagent d'autant plus que leur taille est faible.
Tp Chromatographie D Exclusion Sur Gel Sephadex D
Comparer avec la masse molaire des molécules. En déduire une relation entre la masse molaire d'une molécule (représentant la « taille » d'une molécule) et sa vitesse d'élution lors d'une chromatographie de gel filtration. En s'appuyant sur la structure du gel Séphadex (voir état frais), proposer une explication à la relation proposée. Compléter le schéma d'observation de l'état frais du gel: tracer les parcours dans le gel d'une molécule de lactose (en rouge) et d'une molécule de caséine (en vert). Tp chromatographie d exclusion sur gel sephadex en. Les gels sont caractérisés par leur domaine de fractionnement (masses molaires des molécules à partir desquelles le passage dans les galeries des billes est impossible). Le domaine de fractionnement du gel utilisé est de 1 000 à 5 000 -1. Justifier l'emploi de ce gel pour séparer les protéines et le lactose du lait. D'après les courbes d'élution, commenter l'efficacité séparative de votre chromatographie. Justifier la réponse. Indiquer si cette méthode chromatographique à un but préparatif ou analytique.
Tp Chromatographie D Exclusion Sur Gel Sephadex En
MISE A JOUR: 12 FEVRIER 2021
La séparation des composants du lait est souvent nécessaire pour réaliser des préparations entrant dans l'alimentation humaine, en particulier la séparation des protéines ou des lipides: fromages, crème et beurre. Tp chromatographie d exclusion sur gel sephadex g-50. Il en résulte des déchets comme le lactosérum et le babeurre (petites protéines, lactose, vitamines) qui sont valorisés: compléments alimentaires dans l'alimentation humaine et animale, compost. Le lait le plus utilisé pour l'alimentation est le lait de vache:
Composition pour 1 L
Eau
Lactose
Lipides
(trioléine 30%)
Protéines
(caséine 80%)
Ions minéraux (dont calcium)
Vitamines
(A essentiellement)
Masse (en g)
900
50
35
30
9
Traces
Formule
H 2 O
C 12 H 22 O 11
C 57 H 104 O 6
206 a. a.
Ca
C 20 H 30 O
Masse molaire en -1
18
342
884
25 000
40
286
Les différents constituants du lait peuvent être séparés selon la taille ou la masse, la charge électrique des molécules ou leur solubilité dans des solvants organiques ou à forte teneur en ions.
Tp Chromatographie D Exclusion Sur Gel Sephadex Pour
Ce tampon est composé du tampon tris-HCl, de SDS à de glycérol à du B-mercaptoéthanol à une concentration de 14, 4mM et enfin du bleu de bromophénol à Les rôles du Tris-HCl et du SDS ont été expliqués préalablement. ]
Le gain d'eau correspond au nombre de grammes d'eau fixés par gramme de substance sêche. Gels permanents: ce sont des copolymères organiques ou bien des minéraux (silice). Ici, des effets d'adsorption s'ajoutent au tamisage moléculaire. Carte de sejour - 1233 Mots | Etudier. Figure 2: Représentation d'un gel d'exclusion. Représentation des résultats: Soit l'on porte logarithme de la masse moléculaire en fonction du volume d'élution (Figure 2 ci-dessous): log MM = f (V e)
Soit l'on porte logarithme de la masse moléculaire en fonction du KAV, le coefficient de partage entre la phase liquide et la phase gel: log MM = f (K AV). Le K AV, est le coefficient de partage entre la phase liquide et la phase gel:
K AV = (V e - V m) / (V t - V m)
V t = volume total
(il est mesuré en remplissant la colonne d'eau)
V m = volume mort
(il est déterminé en mesurant le V e d'une substance totalement exclue)
Représentation du logarithme de la masse moléculaire en fonction du volume d'élution:
Figure 3: Variation du volume d'élution en fonction de log MM.