Molécules, taille. Techniques chromatographie, dialyse, ultracentrifugation
Techniques biochimiques de séparation basées sur le critère de la taille des molécules
Le
critère de la taille des molécules donne lieu aux techniques
de:
- Dialyse
- Chromatographie d'exclusion
- Ultracentrifugation La dialyse fait appel à l'utilisation de membranes semi-permeables permettant le passage de momécules de taille définie. La chromatographie d'exlusion (gel filtration) utilse souvent
des sephadex de différentes catégories. Calaméo - Filtration sur gel, méthode de Penefsky. Sephadex G25 est
souvent utilisé pour éliminer les sels contenus dans des
solutions. Etant de faible tailles, les sels sont élués
dans les dernières fractions. Etant de faible taille, les petites
molécules rentrent dans les mailles du gel sephadex et sont ainsi
freinées dans leur parcours dans une colonne ( exercice sur chromatographie d'exclusion). La
dialyse à
l'équilibre est une technique biochimique qui expoite
la taille des molécules. Elle est utilisée en enzymologie
pour tester la fixation de faux substrats ou inhibiteurs
sur le site actif
des enzymes permettant ainsi de déterminer la constante
d'association (binding constant).
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Tp Chromatographie D Exclusion Sur Gel Sephadex Sa
[3]
Une autre utilisation de la chromatographie d'exclusion stérique consiste à examiner la stabilité et les caractéristiques de la matière organique naturelle dans l'eau. [4] Dans cette méthode, Margit B. Muller, Daniel Schmitt et Fritz H. Frimmel ont testé des sources d'eau de différents endroits dans le monde pour déterminer la stabilité de la matière organique naturelle sur une période de temps. [4] Même si la chromatographie d'exclusion stérique est largement utilisée pour étudier les matières organiques naturelles, il existe des limites. L'une de ces limitations comprend qu'il n'y a pas de marqueur de poids moléculaire standard; [4] ainsi, il n'y a rien à comparer les résultats. Si un poids moléculaire précis est requis, d'autres méthodes doivent être utilisées. Tp chromatographie d exclusion sur gel sephadex sa. Les avantages de ce procédé comprennent unebonne séparation des grosses molécules de petites molécules avec un volume minimal d'éluat, [5] et que diverses solutions peuvent être appliquées sans interférer avec le processus de filtration, tout en préservant l'activité biologique des particules à séparer.
Tp Chromatographie D Exclusion Sur Gel Sephadex 1
MISE A JOUR: 12 FEVRIER 2021
La séparation des composants du lait est souvent nécessaire pour réaliser des préparations entrant dans l'alimentation humaine, en particulier la séparation des protéines ou des lipides: fromages, crème et beurre. Il en résulte des déchets comme le lactosérum et le babeurre (petites protéines, lactose, vitamines) qui sont valorisés: compléments alimentaires dans l'alimentation humaine et animale, compost. Le lait le plus utilisé pour l'alimentation est le lait de vache:
Composition pour 1 L
Eau
Lactose
Lipides
(trioléine 30%)
Protéines
(caséine 80%)
Ions minéraux (dont calcium)
Vitamines
(A essentiellement)
Masse (en g)
900
50
35
30
9
Traces
Formule
H 2 O
C 12 H 22 O 11
C 57 H 104 O 6
206 a. CHROMATOGRAPHIE D'EXCLUSION ou CHROMATOGRAPHIE DE FILTRATION SUR GEL - Encyclopædia Universalis. a.
Ca
C 20 H 30 O
Masse molaire en -1
18
342
884
25 000
40
286
Les différents constituants du lait peuvent être séparés selon la taille ou la masse, la charge électrique des molécules ou leur solubilité dans des solvants organiques ou à forte teneur en ions.
Tp Chromatographie D Exclusion Sur Gel Sephadex 15
Gel utilisé: Sephadex G-50, domaine de fractionnement • 1500-30000. Eluant utilisé: tampon phosphate 0.
Le gel de séparation est moins acide que le gel de concentration. Les mailles sont plus petites étant donné qu'il est fortement concentré en polyacrylamide. Ce gel joue le rôle de tamis, en ralentissant les protéines les plus grosses. ] Le peigne fut rajouté afin de créer ces trous de dépôts. Le gel de concentration est peu concentré et possède des mailles larges. A un pH de les ions chlorures seront alors chargés et vont permettre, sous l'action du champ électrique de concentrer les protéines en une bande fine. C. Préparation des échantillons 4 solutions protéiques ont été préparées dans des tubes eppendorfs. La première contient 5uL de marqueurs de masse moléculaire, permettant par la suite, à la détermination du poids moléculaire des protéines présentes dans les autres solutions. ] Ensuite uL de la protéine cytochrome c a été injecté dans un nouveau tube. Tp chromatographie d exclusion sur gel sephadex 15. Enfin, la dernière solution préparée est un mélange composé des protéines précédentes. Dans ces 4 tubes a été rajouté 5uL du tampon de dépôt dénaturant de concentration 1X.
CHROMATOGRAPHIE
Écrit par
Robert ROSSET,
Louis SAVIDAN,
Alain TCHAPLA
• 17 040 mots
• 8 médias
Dans le chapitre « Chromatographie liquide d'exclusion (de filtration de gel ou de perméation de gel) »: […]
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MACROMOLÉCULES
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