Concernant la stabilité des réactifs après ouverture, le laboratoire a suivi les
recommandations fournisseurs. Milieux de Culture - Diagnostic Clinique | bioMérieux France. Les réactifs ont été stockés et utilisés dans le cadre des
délais de péremptions en respectant les préconisations du fournisseur (Bruker®) [19]. 8) Comparaison de méthodes
La comparaison de méthodes a été réalisée en comparant l'identification par
spectrométrie de masse MALDI-TOF avec l'identification par séquençage de fragment de
l'ADNr 16S et du gène rpoD en tant que méthode de référence. Pour cela, une collection
de souches environnementales et cliniques a été utilisée. L'objectif était de vérifier la
corrélation entre les deux méthodes.
Eugon Lt100 - Gélose [Par Milieux ]
7) Robustesse et stabilité des réactifs
La robustesse est une mesure de la capacité d'une méthode à supporter de faibles
changements de conditions expérimentales. Le test de robustesse est indispensable en
portée B du fait de l'utilisation de conditions d'analyse différentes de celles recommandées
par le fournisseur Bruker®. TRYPTO-CASEINE SOJA (TSA) - Gélose - Groupe Solabia. En effet, celui-ci recommande d'utiliser des cultures fraîches
de 18h sur gélose au sang. Le but de la validation de méthode réalisée ici était d'évaluer
l'influence de la durée d'incubation et de la nature des milieux de culture sur les résultats
d'identification. Ainsi ont été évaluées les performances du MALDI sur des cultures de 24, 48 et 72
heures isolées sur des milieux de type gélose au sang (bioMérieux®) gélose trypticase soja
(TSA) (bioMérieux®), géloses sélectives cétrimide (bioMérieux®) et CFC (bioMérieux). La température d'incubation utilisée était de 30°C pour toutes les conditions testées, en
atmosphère aérobie. Pour tester la robustesse, les 7 souches ATCC ont été testées en
double après culture sur les quatre différents milieux et après les trois différents délais
d'incubation.
Trypto-Caseine Soja (Tsa) - Gélose - Groupe Solabia
La gélose est une substance nutritive favorisant ou inhibant ( selon sa composition) la prolifération et le développement des bactéries. Il s'agit donc du milieu de culture des bactéries. Elle est utilisée dans les laboratoires pour déterminer le niveau d'efficacité de nouveaux antibiotiques, tester la résistance bactérienne vis-à-vis de produits déjà connus, ou plus simplement, pour isoler ou cultiver des bactéries. La gélose se différencie du bouillon, la plupart du temps de bouillon de bœuf, par sa solidité due, dans sa composition, à la présence d' agar-agar à hauteur de 20 g/L environ. Validation de méthode de l’identification des Pseudomonas non aeruginosa par. Types de géloses [ modifier | modifier le code]
Selon son contenu, une gélose peut favoriser la croissance de certaines bactéries aux dépens des autres; c'est ce qu'on appelle la sélectivité. De plus, certaines géloses sont différentielles, c'est-à-dire que l'aspect des colonies bactériennes qui s'y forment peut permettre, jusqu'à un certain point, de déduire de quel type de bactérie il s'agit. Voici quelques géloses courantes dans les laboratoires de microbiologie.
Validation De Méthode De L’identification Des Pseudomonas Non Aeruginosa Par
Application Clinique Créé en Juin 2015 Mis à jour en Août 2017
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Milieux De Culture - Diagnostic Clinique | Biomérieux France
incuber les boites dans les 15 minutes qui suivent leur ensemencement et jamais au delà de 30 minutes. D'autres précautions doivent être prises, elles ne sont pas toutes présentées ici, vous les trouverez dans l e communiqué du CA-SFM/EUCAST. Distributeur 16 disques d'antibiotiques
Dépôt des disques d'antibiotiques
Contrôle interne de la qualité
Le contrôle interne de la qualité de cette méthode est réalisé avec des souches de collection. Il s'agit ensuite de consulter le communiqué du CA-SFM/EUCAST et de comparer le diamètre d'inhibition obtenu au diamètre d'inhibition cible et aux limites acceptables. Exemples de résultats d'antibiogramme par la méthode des disques sur gélose Mueller-Hinton et MH-F
Antibiogramme sur MH d'une souche d' Escherichia coli BLSE
Antibiogramme sur MH d'une souche de Klebsiella oxytoca pénicillinase haut niveau
Antibiogramme sur MH d'une souche de Pseudomonas aeruginosa sauvage
Antibiogramme sur MH d'une souche de Staphylococcus aureus sauvage
Antibiogramme sur MH-F d'une souche de Streptococcus G
Antibiogramme sur MH d'une souche de Serratia marcescens
Maîtrise des risques
Pour respecter les exigences de la norme, le laboratoire doit tout faire pour
connaître les risques potentiels pouvant entraîner le rendu d'un résultat erroné. Le but est
de bien identifier les risques, les évaluer pour pouvoir les maîtriser. La méthode des 5M
(Matière, Matériel, Milieu, Méthode, Main d'œuvre) a été utilisée en envisageant tous les
points critiques. Elle concerne la matière (échantillon), le milieu (conditions
environnementales), le matériel (équipements et réactifs), la méthode et la main-d'œuvre. [127]
Une analyse AMEDEC (Analyse des Modes de Défaillance, de leurs Effets et de
leur Criticité) permet d'évaluer la criticité d'un risque.
La gélose au sang frais, comme son nom l'indique, est constituée d'une base nutritive non sélective à laquelle a été ajoutée 5% de sang frais. Elle convient à la culture de certaines bactéries exigeantes, et permet de mettre en évidence le pouvoir hémolytique de certaines bactéries. Cultivent, par exemple, sur ce milieu, les Streptococcus, Neisseria meningitidis, les corynébactéries et bien sûr toutes les bactéries non exigeantes. La base nutritive utilisée est le plus souvent une gélose Columbia ou une gélose Trypticase-soja. Ces bases doivent être naturellement isotoniques pour éviter la lyse spontanée des hématies et ne doivent pas contenir de glucose car ce dernier inhibe l'hémolyse par les bactéries. Le sang frais utilisé est, au préalable, défibriné pour éviter qu'il ne coagule. C'est presque exclusivement du sang de cheval ou de mouton. Composition gélose Columbia
Mélange de peptones
18, 0 g
Extrait de levure
5, 0 g
Amidon de maïs
1, 0 g
Chlorure de sodium
Agar
10, 0 g
pH = 7, 3
Eau distillée
qsp 1 L
La gélose au sang + ANC
C'est une gélose au sang frais rendue sélective des bactéries à Gram positif en ajoutant deux antibiotiques: l' A cide N alidixique et la C olistine.
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