Spécificité
La glucose-oxydase est spécifique du β-D-glucose. Elle catalyse l'oxydation du β-D-glucose selon la réaction suivante:
glucose + O 2 + H 2 O -------> glucono-1, 4-lactone + H 2 O 2
Le glucose à pH 7 se trouve sous forme cyclique à raison de 36, 4% de β-D-glucose et de 63. 6% d'α-D-glucose. La forme linéaire représente une fraction négligeable. L'oxydation du β-D-glucose déplace l'équilibre et l'α-D-glucose se transforme rapidement en β-D-glucose. Test à l oxidase . L'action de la glucose-oxydase sur le glucose se traduit par une très rapide consommation de dioxygène très facilement mesurable avec production de gluconolactone et de peroxyde d'hydrogène. Avec tous les autres sucres, la consommation de dioxygène n'a pas lieu. Spécificité de substrat de la glucose-oxydase
Quels sont les sucres les plus intéressants? Ceux qui ont une structure proche du β-D-glucose. On peut utiliser le L-glucose qui est cher ou le D-galactose beaucoup moins coûteux. Formules linéaires des trois oses
p H
Température
Ce travail est difficile à mener à bien, car il faut veiller à mettre à la même température la solution de glucose, l'enzyme et le récipient qui recevra le mélange.
Test D'Oxydase-Principe, Utilisations, Procédure, Types, Interprétation Des Résultats... | Yakaranda
2. Pour chaque étape, ajoutez l'échantillon avec l'injecteur témoin qui devrait être calibré fréquemment, afin d'éviter la tolérance expérimentale inutile. 3. il opération sera accord effectué aux instructions strictement. Et des résultats d'essai doivent être basés sur les lectures du lecteur d'enzymes. 4. Afin d'éviter la contamination transversale, on l'interdit de réutiliser la membrane de plat de tête et de joint d'aspiration dans des vos mains. 5. Tout l'échantillons, tampon de lavage et chaque genre de rejet devraient selon le processus matériel contagieux. 6. Les agents oisifs seront mis ou couverts. N'employez pas le réactif avec différents groupes. Et employez-les avant date expirée. 7. Test D'Oxydase-Principe, Utilisations, Procédure, Types, Interprétation Des Résultats... | Yakaranda. Le substrat B est sensible à la lumière. On interdit l'exposition prolongée à la lumière. Méthode de lavage
Méthode manuellement de lavage: secouez loin restent liquides dans les plats d'enzymes; placez quelques papiers adonnés à la boisson sur le banc d'essai, et agitez les plats sur le à l'envers fortement.
Les microorganismes sont oxydases négatives si la couleur ne change pas ou si cela prend plus de 2 minutes. lors de l'utilisation du réactif Gordon et McLeod, les microorganismes sont oxydase positive lorsque la couleur passe au rouge dans les 10 à 30 minutes ou au noir dans les 60 minutes. Les microorganismes sont oxydases négatives si la couleur ne change pas.,
méthode D'écouvillon
tremper l'écouvillon dans le réactif, puis toucher une colonie suspecte isolée
observer le changement de couleur dans les 10 Secondes. méthode en Tube à essai
cultiver une culture fraîche (18 à 24 heures) de bactéries dans 4, 5 ml de bouillon nutritif (ou un milieu standard qui ne contient pas une forte concentration de sucre). Ajouter 0, 2 ml d'α-naphtol à 1%, puis Ajouter 0, 3 ml d'oxalate de p-aminodiméthylaniline à 1% (réactifs Gaby et Hadley). agiter vigoureusement pour assurer le mélange et l'oxygénation complète de la culture.,
observez les changements de couleur. Les microorganismes sont oxydases positives lorsque la couleur devient bleue en 15 à 30 secondes.